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呕吐毒素检测如何完成酶联免疫试验

更新时间:2024-10-25   点击次数:230次
脱氧雪腐镰刀菌烯醇又称呕吐毒素,由禾谷镰刀菌产生,常出现在玉米(穗腐病)、小麦和大麦(赤霉病)上。我国谷物中DON的标准为1.0mg/kg。
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测大米、小米、面等谷物及饲料样本中的呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON),试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入标准品或样本溶液,样本中的呕吐毒素和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗呕吐毒素抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含呕吐毒素含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中呕吐毒素的残留量。
酶联免疫试验步骤:
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃
1、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置
2、加样反应:加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟
3、洗涤:小心揭开盖板膜,甩去孔内液体,每孔加350µl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干(用吸水纸拍干,拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)
4、显色:每孔加入底物液A50µl,再加底物液B50µl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟(若蓝色过浅,可适当延长反应时间)
5、终止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应
6、测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成

TEL:18101607379

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